毒理学杂志2008 年6 月第22 卷第3 期p216-218

三聚氰胺的毒性研究
林祥梅1 ,王建峰1 ,2 ,贾广乐1 ,梅林1 ,王众1
(11 中国检验检疫科学院动植物检疫研究所,北京100029 ; 21 南京农业大学动物医学院)

关键词:三聚氰胺;细胞毒性实验;急性毒性;亚急性毒性实验;肾衰竭

作者简介:林祥梅,副研究员,研究方向:动物检疫。

　　2007 年3 月中旬以来,美国发生4 000多起猫、狗
等宠物中毒死亡事件[1-2 ] 。美国食品药品管理局从进
口的部分小麦蛋白粉和大米蛋白粉中检出三聚氰胺等
成分。三聚氰胺多用于生产塑料和肥料,还可制造药
物胶囊[3-5 ] 。在动物饲料中添加三聚氰胺,可提高饲料
的氮含量,让人误以为该饲料的蛋白质比较丰富,但目
前还没有被认定有害人体健康,有关它和其他物质混
合后对动物产生何种影响的资料报道甚少。本试验通
过对三聚氰胺的细胞毒性、急性毒性和亚慢性毒性研
究,客观评价动物长时间接触该化合物的危害性,以及
为中毒动物的治疗提供理论基础。

1 　材料与方法

1.1 　材料　　BHK细胞(由中国人民解放军事医学科
学院提供) ;昆明小鼠,清洁级,体重18 g～22 g ,雌雄各
半, (购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中
心) ;成年健康猫(购自北京大学医学部实验动物中
心) 。
1.2 　主要仪器与试剂　三聚氰胺(北京化学试剂公
司) ,DMEM 培养液, 胎牛血清( 美国GIBCO 公司) ,
MTT溶液(美国Sigma 公司) ,倒置相差显微镜(Dmil
型,美国leica 公司) ,酶标仪(Accent 型, 美国Thermo
公司) ,CO2 培养箱(3111 型, 美国Thermo 公司) ,生化
分析仪(saba18 意大利) ,石蜡切片机(Leica 美国) 。
1.3 　方法
1.3.1 　三聚氰胺对BHK细胞的毒性试验:将三聚氰
胺用培养液加热搅拌溶解,甘油助溶,配成5 mgPml 的
溶液然后在无菌条件下进行3 倍稀释备用。将对数生
长期的BHK细胞消化、计数,用含体积分数为10 %的
胎牛血清的DMEM培养液配成浓度为5 ×104 个Pml 的
细胞悬液,按200μlP孔的密度接种于96 孔培养板, 37
℃、5 % CO2 温箱培养使细胞贴壁。24 h 后弃去旧培养
液,加入不同浓度的样品200μl ,每个稀释度作5 个平
行孔,继续培养20 h 后加入MTT ,每孔20μl ,再培养4
h ,弃去液体后加入100μl DMSO 震荡10 min ,立即在酶
标仪570 nm 波长处测各孔A 值。同时设对照组。重
复上述实验三次。
细胞活力存活率% = ( (样品A 值- 空白组A
值)P(阴性对照A 值- 空白组A 值) ×100 %。
1.3.2 　三聚氰胺的急性毒性试验:称取需要的三聚氰
胺量,用研钵研磨后加蒸馏水到所要求的浓度。选择
健康小鼠,采用灌胃方式从低剂量给药,每组6 只小鼠
(雌雄各半) ,观察48 h。小鼠死亡后剖解观察。
1.3.3 　三聚氰胺的亚慢性毒性试验:将试验猫随机分
为2 组,每组3 只,按照美方提供的饲料中三聚氰胺含
量为214 g 进行添加,采用30 d 连续喂养试验,并于饲
喂后第6、9、15 、23 、30 d 采血做生化指标检查。实验结
束后将实验猫处死,取肾脏固定于体积分数为5 % 的
甲醛中1～3 h ,常规石蜡制片。
1.4 　统计学方法　IC50是将细胞存活率对浓度对数作
图,按作图法用ED50 and IC50 FOR Graded Response (Ver
112 ,日本H1Ono 开发) 程序计算出IC50 。
2 　结果
2.1 　MTT法测定结果　不同浓度的样品对BHK细胞
作用24 h 后, MTT 法测定A570 ,计算细胞的存活率,结
果见表1。统计分析结果表明,三聚氰胺在高浓度时
( ≥11667 mgPml) 与细胞存活率显著相关( P < 0.05) ,
计算IC50为10111 mgPml 。
2.2 　三聚氰胺急性毒性实验结果　最高剂量组给药
后9 h ,小鼠开始出现不安,呼吸急促,随后在几十min
内死亡。其他剂量组小鼠仅见精神不振,反应迟钝,闭
眼伏卧,不食等症状,随后在24～48 h 出现个别死亡。
灌胃死亡的小鼠输尿管中均有大量晶体蓄积,部分小
鼠肾脏被膜有一层晶体。其他脏器未见有明显的变
化。三聚氰胺急性毒性实验小鼠死亡情况见表2 ,三
聚氰胺的全部不致死的最大剂量大于5 000 mgPkg。

2.3 　生化指标的变化　添加三聚氰胺后猫血清尿素
氮(BUN) 和肌酐(CRE) 的变化见图1～2。当饲料中添
加三聚氰胺后,血清BUN 和CRE 逐渐升高,到23 d 这
两项指标超过正常范围(正常范围:BUN : 514～1316
mmolPL ,CRE:62～190μmolPL) 。
2.4 　组织病理学变化　猫在饲喂三聚氰胺30 d 后,
肾脏中可见淋巴细胞浸润,肾小管管腔中出现晶体。
3 　讨论
厂商在植物蛋白粉中添加三聚氰胺的原因,是三
聚氰胺物理性状为白色单斜晶体、无味,这与蛋白粉相
仿,此物质易于购买和生产,成本很低,而三聚氰胺含
氮量高才是最根本原因。蛋白质主要由氨基酸组成,
其含氮量一般不超过30 % ,而三聚氰胺的分子式显
示,其含氮量为66 %左右。由于“凯氏定氮法”只能测
出含氮量,并不能鉴定饲料中有无违规化学物质,所
以,添加三聚氰胺的饲料理论上可以测出较高的蛋白质含量。国内已经有采用高效液相色谱法(HPLC) 法
检测饲料和工业品的三聚氰胺的含量[6，7 ] ,该方法更为
灵敏,简单。
三聚氰胺的全部不致死的最大剂量5 000 mgPkg。
参考国家药物急性毒性分级标准,LD50 > 5 000 mgPkg ,
可以初步认定为微毒或基本无毒。三聚氰胺的亚慢性
毒性试验结果显示,实验组和对照组血常规检测正常,
实验组的血清BUN 和CRE 升高,且在第23 天,这两项
指标超过正常范围,而BUN 和CRE 两项指标的升高在
临床上提示实验动物存在肾衰竭的可能。并且动物饲
喂三聚氰胺后肾脏肾小管中出现了晶体。由此推断三
聚氰胺长期饲喂可能引起肾衰竭,其损伤机制还需要
进一步研究。
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(收稿日期:2007 - 09 - 28)